酶抑制分光光度法介紹

由農藥殘留快速檢測儀生化檢測法開發的速測卡法（酶抑制顯色紙片法）和速測儀法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省級部門小范圍使用過，后被后者取代。目前我省廣泛使用農藥殘留檢測方法主要有兩大類—色譜檢測法和速測儀法。色譜檢測法用作農殘定量分析，可為農藥殘留執法提供依據，主要分布在省級相關部門，部分地州也具有一定的檢測能力。速測儀法只能作農殘定性分析，但它具有短時間能夠檢測大量樣本、檢測成本低，對于檢測人員技術水平要求低，易于在基層推廣等特點，是目前我國控制高毒農藥殘留的一種有效方法，也是目前國內和我省應用Z為廣泛的農藥殘留快速檢測方法。廣泛用于蔬菜、水果生產基地和批發市場等，主要用來防止有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留嚴重超標的蔬菜和水果流入市場。

        一、有機磷農藥和氨基甲酸酯農藥的作用機理

        有機磷和氨基甲酸酯類農藥能抑制昆蟲神經中樞和周圍神經系統中乙酰膽堿酶的活性，造成神經傳導介質乙酰膽堿的積累，影響正常傳導，使昆蟲中毒致死。如果有有機磷農藥存在，有機磷農藥就與膽堿酯梅結合，膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿，造成乙酰膽堿在神經肌接頭和體內其它部位的過量積聚，引起一系列神經中毒癥狀。

            二、乙酰膽堿酯酶抑制法（酶法）的作用原理

        從生物化學的角度看，有機磷農藥和氨基甲酸酯農藥與乙酰膽堿是競爭性作用于膽堿酯酶的，即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結合，催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿，另一方面，如果膽堿酯酶與有機磷農藥結合，就阻斷了反應的進行。根據這個原理，就可以利用膽堿酯酶的催化反應的抑制法，設計一種通過顏色變化的直觀的檢測方法，來快速檢測有機磷農藥和氨基甲酸酯農藥的殘留情況。因此，生物化學法（酶法）就是利用某種酶受影響的程度來反映農產品中農藥殘留量。

        三、速測儀法（酶抑制分光光度法）方法原理

        乙酰膽堿酯酶水解后，水解產物可與顯色劑反應產生顏色，有機磷和氨基甲酸酯類農藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無顯色反應。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留是否存在。在溶液中反應后，用分光光度計測定吸光值隨時間的變化，計算出抑制率，以此判斷蔬菜中含有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的情況。

        四、速測儀法的優缺點：

        優點：在于簡單方便，快捷、成本低廉。整個檢測過程只需30分鐘左右，它可以作為傳統儀器分析方法的有益補充，針對市場、農場蔬菜農藥殘留量進行快速篩選監測，保證上市蔬菜食用的相對安全性。

缺點：酶試劑易失活，導致反應不穩定，檢測結果誤差較大，重復性不好，實際應用中的確認率大約為60%~70%左右；存在檢測盲區，只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農藥，不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農藥；不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現假陽性的農產品；需要對檢測人員進行專門培訓，否則將會對出現的問題無法正確處理或判斷，得出錯誤的結果。